制備液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測,從而實現(xiàn)對試樣的分析。
制備液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點,但也有缺點,與氣相色譜相比各有所長,相互補充。液相色譜的缺點是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測器之間,除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中,如果流動相的流型有變化,被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬,柱效率降低。液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
在柱層析中,溶劑在重力作用下滴入裝有吸附劑的色譜柱中。液相色譜是一種改進(jìn)的柱色譜。在高達(dá)400個大氣壓的高壓下,泵輸送溶劑通過色譜柱。柱吸附劑或固定相通常是由固體顆粒(如二氧化硅或聚合物)制成的顆粒材料。
與柱色譜相比,利用泵輸送,不僅可以快速分析,而且可以使用更小的顆粒作為柱填料。粒子越小,其表面積更大,通過固定相與流動相及樣品組分之間的相互作用,可以更好地實現(xiàn)混合物中各組分分離。流動相通常是溶劑(如水、乙腈、甲醇)的混合物。
提高液相色譜中柱效的有效途徑有:減小填料粒徑,增加色譜柱長,使用盡量大小均一、外型規(guī)則的填料,使用合適的流速,使用合適的流動相組成,使用合適的固定相。